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Western Blot技术
    发布时间: 2018-04-16 17:51    

一、服务介绍

免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(western blot),它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。Western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹(western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹(western blot)常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。本公司可以为您提供全套免疫印迹(western blot)技术服务。

 

二、客户提供

1.客户须在实验开始前确保其细胞或组织中有目的蛋白的表达,并提供目的蛋白的相关信息(蛋白名称、大小等信息),尽可能详细的背景资料,包括蛋白的种属、大小、参考文献等。

2。客户应对所提供的材料及信息负责,如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担

3。新鲜样品(组织为100-150 mg/样,细胞>107 个/样),若为冻存样品,请于-70 ℃以下保存并自备液氮以便运输。一抗,标明来源和稀释度,也可让我司代买。

4。WB所需要的目的蛋白的一抗,可自行提供,或在本公司购买相应指标

 

三、交付内容

  1. 权威完整的实验报告;

  2。 真实的原始实验数据;

  3。 详细的实验步骤。

 

四、服务流程

1。蛋白质抽提;

2.蛋白质定量:按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明完成;

3.变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE):将准备好的样品液和大小marker分别上样,标准加进第一个孔中,电泳分离蛋白;

4.蛋白质转移到PVDF膜,按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层,120 V恒压转移1~2小时;

5.Western blot膜的封闭和抗体孵育:PVDF膜在5%脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合,然后将封闭过的膜加入一抗室温孵育1.5小时,抗原抗体结合。再加入HRP标记的二抗以结合一抗,室温孵育膜1小时;

6.Western blot结果检测:化学发光法检测,膜与化学发光底物孵育,经X胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件,并用Image J分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化;

      7。westernblot数据分析:目的蛋白的灰度值除以内参的灰度值以校正误差,所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量;

8.提供实验报告,包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据。

 

五、实验结果展示:


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